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              免疫组化操作步骤

              2014-12-15 12:55:02      点击:

              免疫组化操作规程
              一仪器设备
              118cm不锈钢高压锅和电炉2医用微波炉3水浴箱; 4冰箱-18-45湿盒6耐高温塑料切片架7可调微量移液器8定时器9pH计
              二试剂
              1PBS(磷酸盐缓冲液pH7.27.4)NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO4 4.3mmol/LKH2PO4 1.4mmol/L
              2柠檬酸盐缓冲液CBpH6.00.01mol/L1000ml配制柠檬酸三钠 3g柠檬酸 0.4g
              3酶消化液 a0.1%胰蛋白酶液用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制 b0.4%胃蛋白酶液用0.1N的HCl配制
              三操作流程
              1 脱蜡和水化
              脱蜡前将组织芯片放在60恒温箱中烘烤30分钟
              1置于二甲苯I中浸泡10分钟在二甲苯II中再浸泡10分钟
              2无水乙醇I中浸泡5分钟在无水乙醇II中再浸泡5分钟
              395%乙醇中浸泡5分钟
              485%乙醇中浸泡5分钟
              570%乙醇中浸泡5分钟
              6蒸馏水中浸泡5分钟
              2抗原修复
              用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片
              1抗原热修复
              A 高温高压热修复 取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于压力锅中大火加热至沸腾将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上放入已沸腾的缓冲液中盖上锅盖扣上压力阀继续加热至喷气从喷气开始计时1-2分钟后压力锅离开热源冷却至室温取出玻片先用蒸馏水洗两次后用PBS洗5分钟
              B微波热修复取一定量的0.01M柠檬酸盐缓冲液pH6.0于微波盒中微波加热至沸腾将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上放入已沸腾的缓冲液中中高档继续处理10-15分钟取出微波盒冷却至室温取出玻片先用蒸馏水洗两次后用PBS洗5分钟
              C酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液胰蛋白酶使用前预热至37切片也预热至37消化时间约为5~30分钟胃蛋白酶消化37时间为10-30分钟
              3免疫组织化学染色
              SP法
              1脱蜡水化
              2蒸馏水中5分钟
              3用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2室温封闭10分钟蒸馏水洗1次
              4抗原修复
              5PBS洗5分钟
              6滴加正常山羊血清封闭液,室温10分钟
              7甩去多余液体滴加抗371小时或者4过夜4过夜后在37复温45分钟
              8PBS洗2次各5分钟
              9滴加生物素化抗孵育条件参见所用试剂盒
              10PBS洗2次各5分钟
              11滴加酶标抗体孵育条件参见所用试剂盒
              12PBS洗2次各5分钟
              13DAB显色510分钟在显微镜下掌握染色程度
              14蒸馏水洗终止染色苏木素复染盐酸酒精分化
              15脱水透明封片镜检
              SABC法
              1脱蜡水化
              2蒸馏水中5分钟
              3用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2室温封闭510分钟蒸馏水洗1次
              4抗原修复
              5PBS洗5分钟
              6滴加正常山羊血清封闭液室温10-20分钟甩去多余液体
              7滴加抗,371小时或者4过夜4过夜后在37复温30分钟
              8PBS洗2次每次5分钟
              9滴加生物素化二抗孵育条件参见所用试剂盒
              10PBC洗2次每次5分钟
              11滴加试剂SABC孵育条件参见所用试剂盒
              12PBS洗2次每次5分钟
              13DAB显色DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色镜下掌握显色程度
              14蒸馏水洗终止染色苏木素复染盐酸酒精分化
              15脱水透明封片镜检
              试剂推荐:

              英文名

              中文名

              规格/价格

               SP Kit (Broad Spectrum).

               免疫组化检测试剂盒(通用型广谱是指;可用于检测兔、大鼠、小鼠和豚鼠来源的一抗)

                3ml/220  6ml/380  18ml/1070

               SP Kit (Rabbit)

               免疫组化检测试剂盒()

                3ml/220  6ml/380  18ml/1070

               SP Kit (Mouse)

               免疫组化检测试剂盒(小鼠)

                3ml/220  6ml/380  18ml/1070

               Double Staining Kit (Mo/HRP+Rb/AP)

               免疫组化双染检测试剂盒(/兔一抗)

                6ml/1860  

               DAB kit

               二氨基联苯胺/DAB染色试剂盒(25倍稀释)        

                1ml/90  

               DAPI

               DAPI染色液(细胞核染色液)

                10ml/90  30ml/220  

               Goat serum

               封闭用正常山羊血清(原液)

                5ml/25  10ml/40  

               Rabbit serum

               封闭用正常兔血清(原液)

                5ml/25  10ml/45  

               mouse serum

               封闭用正常小鼠血清(原液)

                5ml/35  

               IHC Antibody Diluent

               免疫组化抗体稀释液

              100ml/120

               DAB

               DAB显色剂(SIGMA分装)

                5g/380  

               Trypsin Induced Antigen Retrieval Solution

               胰蛋白酶抗原修复液

                3ml/180  10ml/348  

               

               胰蛋白酶抗原修复液(含使用方法说明)

                10ml/348  

               Citrate buffer(0.01MpH6.0)

               柠檬酸盐缓冲液(0.01M pH6.0(抗原热修复试剂)

                1000ml//4  2000ml//8  

               Citrate buffer(1M pH6.0)

               抗原热修复试剂(100×浓缩液)

                70ml/90  

               Poly-L-Lysine Solution(10×)

               多聚赖氨酸(10×防脱片剂)

               5ml/110  10ml/200  100ml/1600

               Poly-L-Lysine

               多聚赖氨酸(防脱片剂)

               25mg/460  50mg/750  100mg/1300

               poly-L-lysine-Prep Slides

               多聚赖氨酸防脱磨砂玻片

                50/100  

               Glass slides

               载玻片

                50/40  

               

               防脱片液(硫酸铬钾-明胶黏片剂粉剂)

                200ml/50  500ml/100  

               HE Staining Kit

               苏木素-伊红染色试剂盒

              50ml/500/180

               APES

               APES防脱片试剂

                10ml/85  

               Citrate buffer powders(0.01M pH6.0) packages

               柠檬酸盐缓冲液(抗原热修复试剂)0.01M pH6.0

                1000ml/pouch/4  

               Citrate buffer(1M pH6.0)

               柠檬酸盐缓冲液 (1M pH6.0

                500ml//200  

               Permount TM Mounting Medium

               中性树胶封片剂

                100ml/150  

               PBS, powder, (0.01MpH7.4) packages

               磷酸盐缓冲液(0.01M pH7.4)(干粉包)

               1000ml/pouch/4  2000ml/pouch/8

               Triton X-100

               聚乙二醇辛基苯基醚

                100ml/40  

               Tris

               三羟甲基氨基甲烷

                500g/85

               Tween 20

               吐温20

                100ml/40  

              白白色在线播放 240| 716| 533| 43| 986| 49| 756| 707| 533| 504| 653| 250| 813| 568| 310| 828| 143| 970| 732| 554| 238| 777| 632| 158| 414| 750| 757| 74| 699| 470| 951| 295| 224| 35| 280| 690| 619| 799| 355| 549| 769|